Hibridização in Situ
Hibridização in Situ
As aplicações diagnósticas são baseadas em sequências curtas de nucleotídeos (oligômeros) marcados com moléculas sinalizadoras não isotópicas, sendo que os sítios de ligação são localizados por reações fluorimétricas ou colorimétrica.
O sistema de detecção ZytoLight® utiliza sondas diretamente marcadas, eliminando a necessidade de utilização de anticorpos secundários conjugados com fluorocromos para a marcação da sonda. Estas sondas são detectadas pela fluorescência, utilizando os filtros correspondentes corretos no microscópio de fluorescência.
Devido a um filtro de excitação, a luz de espectro completo, emitida pela lâmpada do microscópio, é reduzida à luz de um comprimento de onda definido que excita especificamente o fluorocromo da sonda. Esta luz é refletida na amostra por um espelho dicróico.
O fluorocromo emite luz de longos comprimentos de onda que ultrapassam o espelho. Finalmente, um filtro de barreira reduz a luz emitida para um comprimento de onda definido que pode ser detectado.
Dois fatores são essenciais para a avaliação por FISH:
• O fluorocromo das sondas FISH.
• A utilização do filtro correto.
Verifique as especificações dos fluorocromos utilizados nas nossas sondas:
Fluorocromo | Excitação | Emissão | Correspondência |
ZyBlue™ | 418 nm | 467 nm | DEAN |
ZyGreen™ | 503 nm | 528 nm | FITC |
ZyGold™ | 532 nm | 553 nm | Rodamina 6G |
ZyOrange™ | 547 nm | 572 nm | Rhodamina |
ZyRed™ | 580 nm | 599 nm | TexasRed |
Sondas Zytolight
Conheça nossas sondas para tumores sólidos, hematológicos e alterações genéticas.
Reagentes auxiliares
Os reagentes auxiliares da linha Zytolight são padronizados com a melhor formulação para facilitar a realização da técnica FISH.
A utilização do sistema FlexISH® permite maior flexibilidade para a escolha entre o protocolo de reação por FISH entre 1 dia (com 2 horas de hibridização) ou 2 dias (com hibridização overnight).
• O sistema FlexISH® proporciona flexibilidade no prazo dos resultados dos testes por FISH.
• A reação de hibridização pode ser realizada em 2 horas ou overnight.
• A realização do protocolo da técnica a temperatura de 37 °C com o kit FlexISH® é perfeitamente compatível com a rotina do laboratório.
• A hibridização com o protocolo curto de 2 horas não altera a performance do teste, a qualidade do material ou o resultado do diagnóstico.
Sondas FISH FlexISH
O método de hibridização in Situ por fluorescência (FISH) tem sido o método de escolha para a identificação do gene ERBB2 nos casos de resultados duvidosos por imuno-histoquimica. A técnica FISH em tecido parafinado leva aproximadamente 2 dias.
O kit FlexISH ® FISH da Zytovision foi desenvolvido para possibilitar a realização da técnica de forma mais rápida e flexível (2h de hibridação ou overnight).
Reagentes auxiliares
Os reagentes auxiliares da linha FlexISH são padronizados com a melhor formulação para facilitar a realização da técnica FISH.
Descrição do método CISH ZytoDot® – marcação de sinal único para detecção de alterações genômicas
O sistema ZytoDot® usa sondas marcadas com Digoxigenina que são detectadas por um anticorpo secundário de camundongo anti-Digoxigenina. Este anticorpo é detectado por um polímero produzido em cabra anti imunoglobulina de camundongo conjugado com peroxidase (HRP). A reação enzimática com DAB leva à formação de sinais castanhos permanentes que podem ser visualizados por microscopia óptica comum usando um objetivo de 40x.
Descrição do método CISH ZytoDot®2C™ – marcação de sinal duplo para detecção de alterações genômicas
O sistema ZytoDot® 2C™ usa um cocktail de sonda marcado com DIG (digoxigenina) e DNP (2,4-Dinitrophenyl) visando diferentes regiões genômicas que são detectadas usando um coquetel de anticorpos secundários composto por Camundongo-anti-DIG / Coelho-anti-DNP. Estes anticorpos são detectados por um coquetel único de polímeros HRP-Cabra-anti-Camundongo / AP-Cabra-anti-Coelho. A reação enzimática de AP-Red e HRP-Green produz a formação de sinais permanentes intensos vermelhos e verdes respectivamente, que podem ser visualizados por microscopia óptica comum.
As vantagens do CISH são:
- Observação simultânea da morfologia do tecido e dos sinais de marcação por CISH.
- Interpretação rápida e fácil dos resultados comparáveis a imuno-histoquimica.
- Possiblidade de armazenamento das lâminas à temperatura ambiente – os sinais CISH são permanentes.
- Não é necessário microscópio de fluorescência.
SONDAS ZytoDot
Os produtos da linha ZytoDot® e ZytoDot®2C™ são desenvolvidos para a detecção de aneuploidias, amplificações, deleções ou translocações de genes por Hibridização Cromogênica in Situ (CISH) em cortes histológicos fixados em formol e incluídos em parafina; preparados de amostras celulares ou esfregaço de sangue ou medula.
Reagentes auxiliares
Todas as sondas CISH ZytoDot® de uma única cor podem ser combinadas com o Kit de Implementação CISH ZytoDot (C-3018-10 / -40)
Todas as sondas CISH ZytoDot® 2CTM de cores duplas podem ser combinadas com o Kit de Implementação CISH ZytoDot 2C (C-3044-10 / -40)
Os reagentes auxiliares da linha ZytoDot® e ZytoDot® 2CTM são padronizados com a melhor formulação para facilitar a realização da técnica CISH
Descrição do método – ZytoFast® PLUS
O sistema ZytoFast® PLUS usa sondas de oligonucleotídeos conjugadas com Digoxigenina que são detectadas usando anticorpos primários. Estes anticorpos são detectados por polímeros secundários conjugados com enzimas. A reação enzimática de substratos cromogênicos, como por exemplo, NBT / BCIP, AEC ou DAB, leva à formação de precipitados de cores fortes que podem ser visualizados por microscópio óptico comum.
Sondas ZytoFast Plus
Os produtos da linha ZytoFast são desenvolvidos para a detecção e identificação rápida de patógenos virais humanos, ex. HPV, EBV e CMV, e avaliação de clonalidade dos linfócitos através da detecção do RNA das imunoglobulinas de cadeia leve kappa e lambda por Hibridização in Situ cromogênica (CISH), em cortes histológicos fixados em formol e incluídos em parafina ou preparados de amostras celulares.
Reagentes auxiliares
Todas as sondas conjugadas com Digoxigenina podem ser combinadas com um dos kits de implementação ZytoFast® PLUS CISH.
Os reagentes auxiliares da linha ZytoFast PLUS são padronizados com a melhor formulação para facilitar a realização da técnica CISH.
